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上海恒遠(yuǎn)告知:抗磷脂抗體檢測(cè)方法
更新時(shí)間:2014-03-07 點(diǎn)擊次數(shù):1113

檢測(cè)APLAzui敏感試驗(yàn)是1983年介紹的ACLA的檢測(cè),后來(lái)這種方法得到不斷改進(jìn),血清、血漿均可用于分析。該方法即為酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA):用純心磷脂的無(wú)水乙醇溶液(50/11)包被聚苯乙烯反應(yīng)板,常規(guī)方法洗滌后,用10%的BSA封閉;加l:50稀釋的待測(cè)血清,37~C孵育30rain;洗板后,再分別加入HRP標(biāo)記的抗人γ(1:1 500)、抗α(1:1 000)、抗μ(1;8 000)鏈的F(ab)2片段,37℃30min然后,OPD顯色,加終止液。492nm波長(zhǎng)測(cè)吸光度值。結(jié)果以正常對(duì)照組平均值±2S為正常上下限。

    這種以心磷脂作為靶抗原的ELISA方法,由于交叉反應(yīng),ACLA可能會(huì)與其他磷脂結(jié)合。

    操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng):避免脫補(bǔ)體作用(加熱血清至56℃),否則會(huì)引起假陽(yáng)性結(jié)果;反復(fù)凍融樣本也會(huì)導(dǎo)致ACLA結(jié)合力下降;微孔板也很重要。并且,在包被心磷脂同一板上,還可通過(guò)

檢測(cè)APLAzui敏感試驗(yàn)是1983年介紹的ACLA的檢測(cè),后來(lái)這種方法得到不斷改進(jìn),血清、血漿均可用于分析。該方法即為酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA):用純心磷脂的無(wú)水乙醇溶液(50/11)包被聚苯乙烯反應(yīng)板,4~C;常規(guī)方法洗滌后,用10%的BSA封閉;加l:50稀釋的待測(cè)血清,37~C孵育30rain;洗板后,再分別加入HRP標(biāo)記的抗人γ(1:1 500)、抗α(1:1 000)、抗μ(1;8 000)鏈的F(ab)2片段,37℃30min然后,OPD顯色,加終止液。492nm波長(zhǎng)測(cè)吸光度值。結(jié)果以正常對(duì)照組平均值±2S為正常上下限。

    這種以心磷脂作為靶抗原的ELISA方法,由于交叉反應(yīng),ACLA可能會(huì)與其他磷脂結(jié)合。

    操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng):避免脫補(bǔ)體作用(加熱血清至56℃),否則會(huì)引起假陽(yáng)性結(jié)果;反復(fù)凍融樣本也會(huì)導(dǎo)致ACLA結(jié)合力下降;微孔板也很重要。并且,在包被心磷脂同一板上,還可通比較加和不加β2-GPI兩微孔問(wèn)的結(jié)合活性,區(qū)別β2-GPI依賴與不依賴的ACLA。

    流式細(xì)胞術(shù)亦被應(yīng)用于ACLA的檢測(cè),可同時(shí)檢測(cè)APLA同種型。

比較加和不加β2-GPI兩微孔問(wèn)的結(jié)合活性,區(qū)別β2-GPI依賴與不依賴的ACLA。

    流式細(xì)胞術(shù)亦被應(yīng)用于ACLA的檢測(cè),可同時(shí)檢測(cè)APLA同種型。

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